اسم الإختبار
الطفرات التي تحصل عن طريق تسلسل NRAS
الغاية و الهدف من الإختبار
This is a clinical test intended for: Diagnosis, Predictive, Prognostic
الشروط
أربعة شروط يتم إختبارها
- سرطان الجلدو بهذه الحالة يفضّل المختبر سرطان الجلد الخبيث
- سرطان القولون ( CRC)
- سرطان الرئة
- سرطان الغدة الدرقية الحليمي
المنهجية
- تحليل تسلسل EXONS المحدّدة
- تحليل تسلسل SANGER ثنائي الإتجاه
- ABI 3130 X أو 3730 XL
الإستفادة السريرية
الإرشاد و التوجيه في إختبار الدورة الدوائية أو كميّة الدواء
إستراتيجية الإختبار
يتم إختبار و فحص المرضي الذين تمّ تشخيص إصابتهم بسرطان الجلد و سرطان القولون و المستقيم و سرطان الرئة و الغدة الدرقية بسبب طفرة جين NRAS .
سيساعد هذا الإختبار و الفحص في الإرشاد و التوجيه لعلاجهم ( مثل النظر في العلاج بواسطة مضادات EGFR سيتوكسيماب و بانيتوموماب ) للمرضي المصابين بسرطان القولون و المستقيم النقيلي .
أو النظر في العلاج بمصابيح في سرطان الجلد لمرضي سرطان الجلد و كذلك للحصول علي معلومات تشخيصية / تنبؤية ( تشخيص المرض المرضي سرطان الجلد و التشخيص التفريطي لمرضي سرطان الغدة الدرقية
خدمات الإختبار
الإختبار السريري / تأكيد الطفرات التي تم تحديدها مسبقاً
السكان المستهدفين
هذا الإختبار مناسب للمرضي المصابين بسرطان الجلد و سرطان القولون والمستقيم و الرئة و سرطان الغدة الدرقية
الإستفادة السريرية
الإرشاد و التوجيه للدورة العلاجية / كميّة الدواء
المنهجية
علم الوراثة الجزيئية
- تحليل تسلسل exons المحددّة
- تحليل تسلسل sanger ثنائي الإتجاه
- ABI 3130 XL أو 3730XL
كيفية إجراء الإختبار
يتم تضخيم EXONS2 و 3 من جين NRAS بإستخدام PCR و بادئات محدّدة و مشخصة للجينات يتم تنظيف الجزء الخاص بالحمض النووي بإستخدام دورة DYE الكبيرة و عدّة الإختبار التسلسلي ( تقنية الحياة ) . يتم تنظيف تفاعل التسلسل بإستخدام عمود سيفاديكس و تحميله في تحليل ABI الوراثي .يتم إستخدام الإشعال الأمامي و الخلفي MB للتسلسل .
التأكيد علي نتائج الإختبار
تم تأكيد طفرات NRAS التي تم تحديدها في إتجاه واحد في تسلسل خيط DNA الحمض النووي المعاكس.
المصداقية التحليلية
تم تحديد دقّة المقايسة التسلسل ثنائي الإتجاه NRAS في السرطان الجيني ( الوراثي )CGI ليتحدّد بنسبة 95% عن طريق فحص المختبرات . كان هناك توافق بنسبة 100% بين نتائج مقايسة التسلسل ثنائي NRAS SANGER التي قام بها مشغلان مختلفان في ثلاثة أيام مختلفة بالإضافة الي ذلك تم العثور علي هذا الإختبار ليكون دقيقاً حيث كان هناك توافق بنسبة 100% بين نتائج الفحص التي تم إجراؤها في ثلاث نسخ ضمن تشغيل واحد بواسطة مشغّل واحد كانت حساسّية لتحديد دقّة التعديلات المعروفة في خط خليّة MT-NRAS الذي يؤوي الطفرات في EXON ثنائي أكبر من أو تساوي 2.5% كانت حساسّية التحديد الدقيق للتعديلات المعروفة في خط خلية MT- NRAS الذي يؤوي الطفرات في EXON 3 أكبر من أو تساوي 5% بالإضافة إلي ذلك يمكن الوصول إلي LOD لهذا الإختبار عند إدخال 1 نانوغرام MT للحمض النووي . أخيراً أظهرت النتائج BLAST الأولية لأشعال تضخيم NRAS PCR أن أزواج التمهيدي الأمامية و الخلفية للإكسونات 2و3 كانت محدّدة لهدف NRAS المقصود و أنتجت أمبليكون بالطول المتوقّع .
حدود الفاصل للإختبار
تم تخزين الحمض النووي الجيني أو الحمض النووي المعزول من عينّات EFFPE في CGI لمدّة لا تزيد عن 30 يوماً عند 8-2 درجة مئوية تم وضع الحمض النووي في ثلاجة ب 80 درجة مئوية بعد 30 يوماً للتخزين طويل الأجل مطلوب ما لا يقل عن 1 نانوغرام إدخال DNA ( الحمض النووي ) لإكتشاف 2.5% طفرة ضد 97.5% من الحمض النووي الجيني من النوع البرّي في EXON3 من جين NRAS يتم رفض جميع العيّنات منزوعة الكلس .